Измерение интенсивности (оптической плотности)

Анализ интенсивности свечения позволяет получить данные о изображении основываясь на значениях яркости в каждой точке всего изображения или только выбранного участка. Измеряемый параметр, яркость, может быть измерен как в относительных единицах (например, при вычислении относительной оптической плотности), так и в нужных единицах измерения в зависимости от стоящей задачи. Например, при анализе изображений с тепловизора яркость может быть откалибрована в единицах измерения температуры - градусах и т.д.

Одной из распространенных задач является анализ оптической плотности (optical density), который определяет количество вещества в объекте путем измерения количества пропущенного им света. Так как анализ оптической плотности измеряет количество света, прошедшего через материал, то измерения значимы только при анализе изображений, полученных при расположении источника света за объектом, и не значимы при обработке изображений, полученных в отраженном свете. Материал, через который не проходит свет, имеет бесконечную оптическую плотность, а тот, через который свет проходит полностью - нулевую.

В идеале абсолютно черный фон можно было бы взять за нулевое значение, но идеальных систем не существует, а значит камера или другое электромеханическое устройство, используемое для получения изображений, вносят свою погрешность. Поэтому для получения достоверных значений перед измерением оптической плотности следует провести калибровку, измерив уровень черного - сигнал камеры при закрытом затворе, и уровень света, измерив яркость источника света без объекта.

Измерение профиля яркости вдоль линии (полосы)

Анализ профиля вдоль линии позволяет получить данные о распределении яркости вдоль произвольно нанесенной на изображение линии. График профиля показывает по оси Х положения точек, а по оси Y измеренное значение яркости. Таким образом, по оси Х представлена пространственная шкала, а по оси Y шкала в единицах измерения яркости в соответствии с текущей калибровкой. Так, например, при работе с гелем, уровень яркости может быть откалиброван в значениях плотности, а значит вдоль оси X будет показываться распределение плотности. Линия, вдоль которой строится профиль, может иметь любую ориентацию и любую длину.
Программа Image-Pro Plus позволяет получить данные распределения не только вдоль линии, но и вдоль полосы произвольной ширины. Профиль вдоль полосы называется thick profile. Thick profile строит среднее (или среднеквадратическое отклонение) для каждой строки пикселей в вертикальной полосе или для каждого столбца пикселей в горизонтальной полосе. Полученные данные могут быть записаны в файл или переданы в Microsoft Excel. Если на одном изображении присутствует и тестовый и измеряемый объект или необходимо сравнить профили распределения яркости по двум объектам, то используя команду Freeze, можно решить и эту задачу.
В программе Image-Pro Plus предусмотрены дополнительные функции представления информации о интенсивности свечения на всем изображении или в заданной области нтереса. Это гистограмма и битовая карта (bitmap).


Пример измерения оптической плотности цитоплазмы клетки с применением макроса автоматической обработки папки с изображениями с построением гистограммы распределения		OD.AVI (10Мб)